مقایسه بیان ژن های تخمک نارس انسانی قبل وبعد از تزریق سیتوپلاسمی در زنان با ناباروری ناشناخته، مراجعه کننده به بیمارستان میرزا کوچک خان طی سالهای 92-1391

نقش مؤثر اووپلاسم در بلوغ و فعال سازي تخمک ومراحل اولیه تقسیم جنینی، حیاتی و به خوبي شناخته شده است ولي جزئيات آن کاملاً روشن نيست. Cohen و همکاران درسال 1997 اولین حاملگی انسانی را به دنبال انتقال سیتوپلاسم بالغ تخمک اهدایی به تخمک زنان نابارور گزارش کردند. به دنبال تزریق مستقیم سیتوپلاسم از تخمک های اهدایی بالغ منجمدو یا تازه به تخمک گیرنده با روش ICSI تعدیل شده، بیشتر از 30 تولد زنده سالم در انسان تا سال 2004، گزارش شد. تکنیک تزریق سیتوپلاسمی عبارت است از تزریق 10 تا 15% از سیتوپلاسم یک تخمک بالغ اهدایی به سیتوپلاسم تخمکی دیگر، به منظور پیش برد مراحل تکوین آن در شرایط آزمایشگاهی. سیتوپلاسم تخمک بالغ با داشتن عوامل تنظیم کننده چرخه سلولی، میتوکندری سالم، میکروتوبول های دخیل در تقسیم سلولی، آنزیم های همانند سازی DNA و افزایش سطح mRNA می تواند موجبات تکمیل بلوغ تخمک را فراهم آورد. این تکنیک می تواند به زنان نابارور که در چرخه هاي قبلي خود سابقه شکست مکرر در IVF و عدم موفقيت در لانه گزيني به دليل کيفيت بدجنيني داشته اند، مورد استفاده قرار گیرد. با توجه به مطالعاتی که بر روی میزان بیان ژن های دخیل در روند طبیعی رشد و تکامل تخمک انسانی، انجام شده است، این مطالعه قصد دارد تغییرات بیان ژن هایی که در تخمک به دنبال تزریق سیتوپلاسمی رخ می دهد، با استفاده از آن دسته ازتخمک های انسانی که از نظر اخلاقی مشکل نداشته و قابل دسترس نیز باشند (از جمله تخمک های اهدایی و نابالغ)، بررسی و با گروه شاهد مقایسه نماید. در این مطالعه تخمک هاي نارس ، به سه گروه تقسیم می شوند: 1- 30 عدد تخمک نارس به عنوان گروه مداخله: 15% سیتوپلاسم به آنها تزریق شده و 24 ساعت در محیط کشت G1 در انکوباتور نگهداری میشوندو سپس محلول Trizol به آنها اضافه و در دمای 80- درجه سانتی گراد نگهداری می شوند 2- 60 عدد تخمک نارس به عنوان گروه شاهد: این گروه، خود به دو sub groups تقسیم می شود: 1-2. 30 عدد تخمک نارس بلافاصله بعد از pick up که در محلول Trizol قرار داده می شوند و در دمای 80- درجه سانتی گراد نگهداری می شوند. 2-2. 30 عدد تخمک نارس بدون دریافت سیتوپلاسم، به مدت 24 ساعت در محیط کشت G1 در انکوباتور نگهداری میشوندو سپس محلول Trizol به آنها اضافه و در دمای 80- درجه سانتی گراد نگهداری می شوند. پس از پایان نمونه گیری تخمکهای هر گروه جداگانه با هم pool میشوند.سپس RNAآنها استخراج وcDNAسنتز می گردد. نهایتا به روش Q RT-PCR میزان بیان ژن های مورد هدف، در هر گروه جداگانه تعیین و مقایسه می گردند. میزان تغییرات مورفولوژیکی تخمک های گروه مداخله و شاهد پس از24 ساعت کشت، به عنوان هدف جنبی با استفاده از میکروسکوپ معکوس، ثبت می گردند.

دانشگاه علوم پزشکی تهران